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無血清細(xì)胞凍存液的操作方法
2024-08-21
無血清細(xì)胞凍存液的操作方法主要包括細(xì)胞的收集、離心、凍存液的加入、分裝、凍存以及后續(xù)的解凍與復(fù)蘇等步驟。以下是詳細(xì)的操作方法：一、細(xì)胞的收集與離心細(xì)胞收集：使用常規(guī)方法收集處于對數(shù)生長期的懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞。對于貼壁細(xì)胞，可以使用胰酶或EDTA等試劑進行消化，使其從培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板表面脫落，然后收集到試管或離心管中。細(xì)胞離心：將收集到的細(xì)胞懸浮液置于離心管中，進行離心處理以收集細(xì)胞沉淀。離心條件通常為1,0002,000rpm，4℃，持續(xù)35分鐘。注意，離心時應(yīng)確保溫度適宜，以...
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蛋白酶K的酶學(xué)特性及其在生物醫(yī)學(xué)研究中的重要性
2024-08-17
蛋白酶K，屬于一種廣譜蛋白酶，由白色念珠菌（Candidaantarctica）發(fā)酵產(chǎn)生。它能夠在較寬的pH值范圍內(nèi)（pH4-12）保持活性，且在高溫條件下（65℃）仍能穩(wěn)定工作，這種穩(wěn)定性使蛋白酶K能夠在多種實驗條件下發(fā)揮其作用，成為科研人員手中的得力助手。在分子生物學(xué)領(lǐng)域，蛋白酶K的應(yīng)用尤為廣泛。在DNA提取過程中，蛋白酶K能夠高效地降解細(xì)胞和組織中的蛋白質(zhì)，包括那些與DNA緊密結(jié)合的組蛋白，從而釋放出純凈的DNA，為后續(xù)的PCR擴增、測序等實驗提供高質(zhì)量的DNA模板。此...
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RIPA裂解液介紹與如何選擇
2024-08-15
提到蛋白提取，大家不約而同會想到RIPA裂解液，裂解液加入樣品中，離心即可完成蛋白的提取。然而RIPA裂解液我們真的用對了嗎？RIPA裂解液是從動物細(xì)胞或組織中提取蛋白的常用裂解液，其工作原理是利用去污劑（表面活性劑）裂解細(xì)胞膜和核膜，從而獲取細(xì)胞和組織中的RIPA可溶性蛋白。RIPA裂解液的選擇RIPA裂解液中主要包含去污劑，緩沖體系，等滲體系，變性劑、穩(wěn)定劑等。其中去污劑是細(xì)胞裂解液中重要成分，是由疏水尾端基團和極性親水頭端基團組成的兩性分子，它們能夠降低水的表面張力，所...
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bca法測蛋白濃度原理、實驗步驟及注意事項
2024-08-15
蛋白質(zhì)濃度測定是用于計算純化方法的回收率的重要方法。常用的測定方法包括雙縮脲法、Lowry法、紫外吸收法、BCA蛋白濃度檢測法等。其中常用的方法就是BCA法。BCA全稱是BicinchoninicAcidAssay，也叫SmithAssay，這個方法是由PaulK.Smith發(fā)明的。這個方法通過展示不同濃度樣品的顏色變化來判斷蛋白的濃度。檢測原理BCA是一種堿性的水溶性復(fù)合物，性質(zhì)穩(wěn)定。在其提供的堿性環(huán)境下，蛋白質(zhì)可以將BCA試劑中的Cu2+還原為Cu+，Cu+繼而與BCA試...
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DNA電泳套裝：揭開基因的奧秘
2024-08-15
在現(xiàn)代生物技術(shù)領(lǐng)域，DNA電泳技術(shù)已成為一種實驗手段。它廣泛應(yīng)用于基因克隆、基因突變檢測、DNA序列分析等領(lǐng)域。而DNA電泳套裝則是進行這項實驗的工具。本文將為您詳細(xì)介紹DNA電泳套裝的組成、原理及其在生物科研中的應(yīng)用。一、DNA電泳套裝的組成DNA電泳套裝主要包括以下幾部分：電泳儀：用于提供穩(wěn)定的直流電源，使DNA分子在電場作用下發(fā)生遷移。電泳槽：一般為矩形或梳子形狀，用于裝載電泳凝膠。電泳凝膠：由聚丙烯酰胺或瓊脂糖等物質(zhì)制成，是DNA分子遷移的載體。凝膠制備試劑：包括凝膠...
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黑膠蟲污染怎么解決（黑膠蟲清除劑）
2024-08-09
黑膠蟲是一種生物還是非生物，學(xué)術(shù)界至今還有爭議，這里暫且將其認(rèn)作是一種微生物。黑膠蟲往往來源于血清，是一種常見的細(xì)胞污染物，與細(xì)胞共生，隨細(xì)胞傳代而傳代，通?？股貙ζ錈o效。黑膠蟲與細(xì)胞競爭性生長，對細(xì)胞生長不利，嚴(yán)重時導(dǎo)致細(xì)胞死亡。目前很多細(xì)胞存在被黑膠蟲污染的現(xiàn)象，對細(xì)胞培養(yǎng)及其后續(xù)實驗造成了極大地影響。黑膠蟲特征?培養(yǎng)基和正常培養(yǎng)基沒有區(qū)別；?低倍鏡下是黑色的點點和細(xì)胞碎片沒有區(qū)別；?高倍鏡下可以觀察到點狀片狀的游動小體，能模仿細(xì)胞碎片和細(xì)胞分泌物做布朗運動；?與細(xì)胞的...
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活性氧ROS檢測原理及檢測步驟
2024-08-09
ROS也叫活性氧（reactiveoxygenspecies）是細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的一種具有氧化活性的化學(xué)物質(zhì)，包括過氧化氫、超氧陰離子等。ROS在正常生理條件下也會產(chǎn)生，但當(dāng)其產(chǎn)生過多或清除不足時，會對細(xì)胞造成氧化應(yīng)激，導(dǎo)致細(xì)胞損傷和疾病發(fā)生。檢測原理用于檢測細(xì)胞內(nèi)ROS廣泛采用的方法是DCFH-DA熒光探針法。DCFH-DA（二氯熒光黃雙乙酸鹽）是一種可指示的探針，其本身不具有熒光，但可以自由穿過細(xì)胞膜。一旦進入細(xì)胞，它會被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解成DCFH。由于DCFH無法穿過細(xì)胞膜，...
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原代細(xì)胞凍存液在生命科學(xué)中的應(yīng)用與展望
2024-07-31
在生命科學(xué)研究的浩瀚海洋中，細(xì)胞作為最基本的生命單位，承載著無數(shù)科學(xué)家的探索與希望。而原代細(xì)胞，直接來源于生物體的組織，因其保持了最原始的生理特性和基因表達(dá)，成為了科研領(lǐng)域中一顆璀璨的明珠。然而，原代細(xì)胞的培養(yǎng)和保存卻是一項具有挑戰(zhàn)性的任務(wù)。在這一過程中，原代細(xì)胞凍存液扮演了至關(guān)重要的角色，如同時間膠囊一般，為科學(xué)家們提供了保存和復(fù)蘇細(xì)胞的可能，極大地拓展了生命科學(xué)研究的邊界。細(xì)胞凍存，是一種將細(xì)胞置于低溫（通常為液氮溫度，即-196°C）下保存的技術(shù)，其核心在于利用凍存液中...
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